尊龙凯时-人生就是博提供优质的细胞培养条件，采用DMEM培养基，配合10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S），使用贴壁细胞培养。温度设定在37℃，在首次传代时建议采用1:2的比例。培养期间每两天更换培养基，并建议同时购买细胞，以获得超值优惠。细胞在运输后应及时处理，待其恢复至良好状态后，用完整的培养基灌满并密封瓶口，确保最佳运输效果。

收到细胞后，务必使用75%酒精对细胞瓶进行喷洒消毒，并在超净台内严格执行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以期稳定细胞状态，再进行后续处理。同时，建议使用显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议拍摄40x、100x和200x的各一张），前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。

尊龙凯时-人生就是博的细胞培养步骤如下：
**细胞传代**
1. 如果细胞汇合度未超过80%，则将培养瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，放入37℃、5% CO2的孵箱中继续培养。
2. 如果细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤为：
a. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS对细胞进行1-2次洗涤。
b. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放置于37℃的培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，如大多数细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
c. 温和吹打细胞，确保其完全脱落后，吸出细胞悬液，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补充1-2ml的完全培养基重悬细胞。
d. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

**悬浮细胞传代步骤**
1. 半换液法：竖着放置培养瓶于培养箱静置约1小时，轻轻吸出3ml的培养基，并补充3ml新的完全培养基，若培养基颜色变化缓慢，可加入约500μl的FBS，之后可直接补充5ml培养基并分至两个培养瓶培养。一般经过约三次传代后，便可进行离心处理，去除死细胞。
2. 离心换液法：若需要分瓶可将细胞悬液收集至离心管中，以1000rpm离心5分钟，弃去上清，再补加1-2ml培养液后重悬并混匀，按照1:2的比例分装到新的T25瓶中，添加6-8ml全新的完全培养基以保持细胞活力；后续传代可根据实际情况，按1:2至1:5的比例进行。

**细胞冻存步骤**
1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃掉T25培养瓶中的培养液并用PBS清洗一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，观察至细胞回缩变圆后立即加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，并以1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清后，将沉淀细胞与1ml雅吉生物的无血清冻存液（货号：C7001）混匀并转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存。如果需要后期转入液氮罐，须在-80℃冰箱中存放超过24小时后再进行转移。

**细胞复苏步骤**
1. 从液氮中取出细胞冻存管，注意佩戴防护面具，迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，外壁用75%酒精擦拭。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，更换为新鲜的完全培养基，以继续培养。

**注意事项**：一些细胞可能因黏附不牢，在运输过程中易发生脱落，这是正常的现象。如有较多细胞脱离，请将培养瓶内的培养液收集至离心管中，以1000rpm离心5分钟，收集上清作为过渡培养（后期对比培养），沉淀后加入1-2ml胰酶轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应，再离心，弃去上清，补充1-2ml完全培养基进行重悬。最后按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。